期刊简介
《岭南现代临床外科》杂志系由广东省卫生厅主管、广东省医学学术交流中心主办、中山大学孙逸仙纪念医院承办的专业期刊，国际标准刊号：ISSN 1009-976X，国内统一刊号：CN 44-1510/R。杂志创刊于1995年，面向全国公开发行出版，现为中国核心期刊（遴选）数据库和中国学术期刊综合评价数据库统计源收录，是一本集权威性、科学性、创新性、实用性和收藏性为一体的学术刊物。杂志以普通外科为主，涵盖骨外科、心胸外科、泌尿外科、神经外科、血管甲状腺外科、乳腺外科、整形外科、小儿外科和外科急危重病救治等广泛学术领域，以从事外科领域临床、科研、教学工作的各级医师和科研人员为读者对象。现设栏目：述评、专家笔谈、论著、短篇论著、临床研究、综述、新技术、新进展、病例报告、术式讨论、学术争鸣、经验交流等。本刊办刊宗旨：全面系统地反映我国外科专业的学术动态，及时报道外科临床及科研新理论、新技术、新进展，努力促进我国临床外科的学科发展和学术交流。
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首页>岭南现代临床外科杂志
- 杂志名称：岭南现代临床外科杂志
- 主管单位：广东省卫生厅
- 主办单位：广东省医学学术交流中心
- 国际刊号：1009-976X
- 国内刊号：44-1510/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中国学术期刊(光盘版)全文收录期刊期刊收录：知网收录(中), 国家图书馆馆藏, 维普收录(中), 上海图书馆馆藏, 万方收录(中)
人肝细胞核因子4α重组慢病毒载体的构建与鉴定
邓洁敏；邓小耿；蒋雯丽；邱荣林；伍耀豪；曾乐祥；周嘉嘉；张杰
关键词：HNF, HNF4A, 慢病毒, 载体构建
摘要：目的 构建肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4 alpha,HNF4A)的过表达慢病毒载体,并对其进行病毒包装、鉴定与滴度测定,为进一步研究HNF4A的功能和作用机制奠定基础.方法 利用PCR法扩增人类基因组DNA中HNF4A的cDNA序列,并将其克隆至PCDH-CMV-MCS-EF1a-GFP-puro慢病毒表达载体上,经双酶切及测序鉴定,将阳性重组PCDH-CMV-HNF4A-EF1a-GFP-puro表达载体、pCMV-VSV-G和pCMV-dR8.91三质粒共转染到HEK-293T细胞,收集上清,将获得的病毒悬液浓缩后梯度稀释后感染HEK-293T细胞,并利用绿色荧光蛋白检测病毒滴度.将重组慢病毒感染原代培养人皮肤成纤维细胞HFFs,并利用荧光定量PCR检测HNF-4A的表达.结果 重组慢病毒表达载体PCDH-CMV-HNF4A-EF1 a-GFP-puro酶切及测序鉴定证明载体构建成功,并得到滴度为1×108 TU/mL的病毒液.病毒感染人皮肤成纤维细胞后HNF4A表达显著增强.结论 通过优化载体构建方法成功构建人HNF4A的重组慢病毒载体并可在HFFs内显著过表达HNF4A,为HNF4A的研究提供更高效稳定的基因载体.
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